Как определяют гепатит с с помощью анализа крови пцр

НАШИ ЧИТАТЕЛИ РЕКОМЕНДУЮТ!

Для лечения печени наши читатели успешно используют Leviron Duo. Видя, такую популярность этого средства мы решили предложить его и вашему вниманию.
Подробнее здесь…

Острый гепатит C является широко распространенной вирусной инфекцией. Заболевание антропонозное, то есть в нормальных условиях развивается только в человеческом организме. Возбудителем болезни служит вирус HCV.

Для начала развития инфекции вирус должен попасть непосредственно в печень. Основным путем заражения организма является контакт с инфицированной кровью и / или ее компонентами.

 Вирус обнаруживается с помощью анализа крови на гепатит C методом ПЦР.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

Сложность диагностики инфекции до приобретения хронической формы состоит в том, что протекает она бессимптомно. Выявляется болезнь часто случайно, во время прохождения обычных медосмотров, диспансеризации.

Особенности генетической вариабельности HCV

Организм человека не способен выявить и обезвредить попавший в организм вирус гепатита C на ранних стадиях инфицирования, что связано с генетическим непостоянством HCV. Нить РНК вируса имеет протяженность около 10 000 нуклеотидов, которые быстро замещаются.

В настоящий момент известно 6 генотипов и свыше 90 субтипов HCV. Существуют так называемые квазивиды — множественные вариации вируса гепатита C.

Внутри одного генотипа вируса образуется большое количество мутированных, генетически родственных его вариаций. Разные квазивиды одного генотипа являются результатом генетической нестабильности HCV. Они образуются в ходе мутаций при размножении вируса гепатита C.

Наличие различных вариаций одного и того же генотипа объясняет отрицательный ответ вируса на иммунные атаки организма, а также сохранение его длительной активности.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

Приобретение хронической формы болезни, безрезультатная терапия интерферонами и риск повторного инфицирования являются следствием генетической мутации вируса.

Инфицирование

Инфекция острого гепатита C передается путем попадания зараженной крови в кровоток здорового человека. Такой путь передачи называется парентеральным.

В зоне высокого риска заражения находятся люди, которые могут контактировать с потенциально инфицированной кровью.

Это сотрудники медицинских лабораторий, пациенты, требующие переливание крови, трансплантацию органов, а также находящиеся на диализе.

В салонах красоты (предоставляющих услуги пирсинга, тату, маникюра и т.д.), а также стоматологических кабинетах все манипуляции должны происходить в санитарных условиях с использованием стерильных инструментов, так как HCV может попасть в организм через загрязненные инструменты.

Отдельно следует выделить наркозависимых людей. Многократное использование одного шприца с иглой разными лицами в разы повышает риск инфицирования. Именно наркоманы составляют большую часть больных гепатитом C и являются переносчиками вируса HCV.

В бытовых условиях инфекция может распространяться через личные средства гигиены: зубные щетки, бритвенные принадлежности.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

Все способы передачи инфекции, кроме контакта с кровью, называются общим словом непарентеральный путь заражения. Таким способом гепатит C передается крайне редко, что связано с малой концентрацией вируса. Половой путь передачи составляет не более 10% случаев заражения. Передача вируса с молоком кормящей матери относится к единичным случаям.

Всем, кто находится в группе повышенного риска заражения, а также тем, кто имел неосторожность контактировать с инфицированной кровью, рекомендуется сдать анализы крови на выявление HCV.

Особенности диагностики

Из-за отсутствия специфических симптомов острого вирусного гепатита C заболевание в большинстве случаев приобретает хроническую форму.

В первые несколько недель после инфицирования (в среднем 3 недели) можно обнаружить РНК вируса гепатита C в крови больного.

Для выявления вируса гепатита, его вида, генотипа необходимо лабораторное исследование биологического материала: крови и ее сыворотки, лимфы, фрагментов тканей печени.

Такое исследование проводится не только для диагностики, но и для определения качественной интерферонотерапии.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

Как правило, антитела к HCV обнаруживаются посредством иммуноферментного анализа (ИФА). Данное исследование дает исчерпывающий ответ: «обнаружено» или «не обнаружено». Соответственно, проба положительна или отрицательна.

Антитела, обнаруженные с помощью ИФА, не всегда свидетельствуют о присутствии HCV в организме. Часто такой анализ дает ложноположительные результаты. Это связано с тем, что человек когда-то заразился гепатитом C, но произошло самоизлечение, а антитела в организме остались.

В случае обнаружения в исследуемой крови анти-HCV назначается дополнительное ПЦР-исследование на гепатит C.

Среди современных методов диагностики стоит выделить ПЦР-анализ на гепатит C как наиболее качественный и точный.

С помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) представляется возможным выявить возбудителя гепатита C (вирус HCV).

Данная диагностическая методика может обнаружить вирус даже при минимальной концентрации HCV в биологическом субстрате спустя всего 5 дней после инфицирования.

Это позволяет начать противовирусную терапию еще до значительного поражения печени, так как за такой короткий промежуток времени организм не успевает выработать антитела.

Полимеразная цепная реакция разделяется на два типа: качественная и количественная.

Качественный анализ ПЦР на гепатит C помогает выявить присутствие HCV в крови как такового. Положительный результат исследования крови методом ПЦР говорит об инфицировании организма вирусом HCV.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

Делается качественный ПЦР тест на выявление гепатита C после положительного результата ИФА, то есть, когда обнаружены антитела к данному вирусу.

Расшифровка анализа ПЦР констатирует присутствие или отсутствие вируса HCV в организме, то есть результат ПЦР положительный или отрицательный соответственно.

Исследование крови здорового человека с помощью ПЦР-анализа всегда покажет отрицательный результат.

Количественный тест ПЦР определяет вирусную нагрузку (виремию), то есть концентрацию HCV в биологическом субстрате. От величины вирусной нагрузки зависит течение всей болезни в целом. При низкой концентрации интерферонотерапия завершается положительным результатом. Иногда сроки терапии могут быть сокращены.

Высокая концентрация вирусов, напротив, делает противовирусную терапию малоуспешной, повышается риск развития тяжелых осложнений. Люди, у которых высокая виремия, могут передавать гепатит C непарентеральным путем: половым, контактно-бытовым, от матери к ребенку.

Концентрация вируса в биологическом субстрате измеряется в единицах (МЕ) на 1 мл крови (реже копии/мл). Если расшифровка количественного ПЦР-анализа на гепатит C показывает виремию выше 800 000 МЕ/мл (2 млн копий/мл), то это указывает на высокую концентрацию HCV. Если количество меньше 400 000 МЕ/мл (1 млн копий/мл), то вирусная нагрузка считается низкой.

Пример результатов количественного ПЦР теста на гепатит C:

Примечание: ПЦР-анализ на гепатит C имеет нижний порог чувствительности, равный 10 единицам. Это означает, что при концентрации HCV в биологическом материале ниже порога чувствительности тест может оказаться отрицательным, хотя вирус присутствует. Низкая концентрация вируса обычно связана с проводимой противовирусной терапией.

Вирусная нагрузка (точнее, ее уровень) не определяет степень поражения печени и тяжесть заболевания. Достоверную информацию о патологии можно получить с помощью биохимических показателей исследования крови, а также биопсии фрагментов ткани печени.

Для результативной противовирусной терапии очень важным остается определить генотип НСV.

Расшифровка анализа ПЦР на гепатит С

Специальное лабораторное исследование — анализ пцр на гепатит с — значительно упрощает диагностику этого вирусного заболевания. Исключением не является и гепатит С.

Небольшая по объему проба крови может быть проверена на содержание рнк и другой генетический материал вирусного агента.

Анализу с проведением пцр подвергаются все лица с циркулирующими в плазме крови антитела к гепатиту С, наличие которых подтвердило качественное обнаружение.

Расшифровка результатов интерпретируется в графе бланка исследования как «положительный» или «отрицательный» анализ. Кроме этого, с помощью пцр возможно не только качественно определить минимальное содержание вируса, но и подсчитать число частиц. Таким образом, можно определить предполагаемую вирусную нагрузку и максимально точно определиться с врачебной тактикой лечения.

Вирусное поражение печени

Печень как элемент пищеварительного тракта принимает на себя огромную нагрузку. В ее клетках происходит большинство метаболических реакций всех видов обмена, что обеспечивает оптимальное функционирование всех органов и систем. В тоже время велико ее детоксикационное значение для выведения шлаков и продуктов обмена с ферментативной желчью.

Поражение печени вирусами различной природы чрезвычайно опасно для органа. Разнообразная клиническая картина и неподатливость лечению выводит гепатиты на первое место по опасности для здоровья.

Гепатит С носит хронический характер и долгое время может давать отрицательный результат тестирования, медленно паразитируя в организме человека. Передается вирус через биологические жидкости: кровь и реже через сперму.

Наркотическое злоупотребление нестерильными шприцами, естественное родоразрешение зараженных женщин, случайные травмы или порезы медработников могут повлечь передачу вируса здоровым людям.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦРСвоевременная диагностика заболевания затрудняется скрытой клинической картиной и бессистемностью патологии. Положительный результат может быть просто упущен некачественным выполнением анализов. Только значительное поражение клеток печени вызывает определенную симптоматику, однако, отрицательный эффект виремии к тому времени не оставляет шансов восстановить орган.

Современная медицина разработала специальные методы распознавания малейших следов вируса. Пцр, ифа, биопсия печени позволяют распознать малейшее повреждение печени и минимальный уровень антител против вируса. Анализ cпомощью пцр наиболее прост и достоверен в диагностической практике.

Качественный анализ

Суть полимеразной реакции заключается в наработке последовательности рнк. Реакция выполняется при наличии в плазме крови таких же вирусных белков.

Специальные катализаторы позволяют синтезировать сходную вирусной последовательности цепь, которую сравнивают с известными нуклеотидами вирусной рнк. На основе этого и определяют вирусную нагрузку и поражение печени.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦРПцр способна уловить даже единичное присутствие искомого гена во взятой крови. Такая диагностическая цепная реакция также весьма специфична. Последовательность нуклеотидных цепей уникальна для каждого существа, так что ферментативные праймеры создают идентичные последовательности искомой генетической информации. Таким образом, можно с малейшей точностью выявить любой вирус, даже если его количественный показатель чрезвычайно мал.

НАШИ ЧИТАТЕЛИ РЕКОМЕНДУЮТ!

Для лечения печени наши читатели успешно используют Leviron Duo. Видя, такую популярность этого средства мы решили предложить его и вашему вниманию.
Подробнее здесь…

Пациентам, в крови которых были обнаружены выработанные антитела против вирусного гепатита, проводят качественное исследование пцр или ифа. Результат анализа может быть как положительный, так и отрицательный, что в обоих случаях требует лечения.

Расшифровать положительный ответ цепной реакции следует как наличие фрагментов рнк гепатитного вируса или как явление инфицирования.

В плазме крови в данный момент вирус активно размножается и паразитирует над клетками печени.

Пцр-диагностика может дать отрицательный ответ в случае, если частиц вирусной рнк присутствует в плазме мало, ниже уровня чувствительности теста или их вовсе нет.

После непосредственного заражения количество вируса нарастает сравнительно медленно, и только спустя 1–2 недели ифа или другое качественное исследование способны их выделить.

Отрицательный анализ можно получить и в следующих случаях:

  1. При взятии материала в ненадлежащих условиях, получении пробы крови с загрязнениями;
  2. При ранее произведённых пациенту инъекциях гепарина.
  3. При присутствии во взятых образцах других ферментов и субстратов, нарушающих ход цепной реакции.

Количественный анализ

Количественный тест как микробиологическая диагностика призван определять вирусную нагрузку.

Подтвержденный качественный анализ на виремию служит основанием для определения количества генетического материала и его концентрации. Число выявленных вирусных рнк определяют в единице объема крови, обычно в 1 миллилитре.

Искомые материалы выражают в международных единицах, некоторые лаборатории в анализах ифа используют количество копий.

Обычно до проведения любой терапевтической схемы проводится количественный анализ пцр. Подсчет вирусных рнк проводят достаточно часто: спустя одну, четыре, двенадцать и двадцать четыре недели. 12-ая неделя считается показательной, так как на основе анализа в этот период проводится расшифровка эффективности лечебных мероприятий.

Количественный анализ с помощью пцр или ифа предполагает взятие проб из вены.

Интерпретация результатов как высокая вирусная нагрузка начинается от цифры в 800000 МЕ/мл. Такой положительный результат на гепатит С отражает наличие не менее 3000000 копий в одном миллилитре крови. Низкий уровень виремии останавливается на цифре в 400000 МЕ/мл. Результатами исследования могут быть значения как отрицательный ответ, а также показатель «ниже измерительного диапазона».

Читайте также:  Что происходит с печенью при гепатите с и как ее восстановить после болезни

Количественный тест с оценкой «ниже диапазона измерений» говорит, что в ходе реакции не удалось произвести подсчет рнк. Вирус же в организме все же циркулирует, на что указывает положительный качественный тест. Отрицательный показатель количественного анализа пцр или ифа свидетельствует об отсутствии рнк в данной пробе крови.

Несмотря на ограниченные способы передачи вируса через кровь, повышается риск передачи вируса через секреты половых желез, от матери к ребенку.

Количественный анализ оказывает существенную помощь в оценке терапевтических мероприятий. Ифа и пцр отражают действие противовирусных лекарственных средств, помогают установить сроки терапии и оценить формирование иммунитета больных. Скорый отрицательный ответ лабораторных тестов свидетельствует об успешном лечении и необходимости сократить сроки терапии.

Медленное снижение показателей виремии можно расшифровать как необходимость видоизменения терапевтического курса. Уровень вирусной нагрузки определяет и прогноз заболевания. Гепатит с низким данным показателем, скорее всего, будет просто лечить и можно полностью вывести вирус из организма.

Высокие показатели вирусного присутствия в крови требует внимательного отношения и разностороннего лечения.

Расшифровка анализа ПЦР гепатита C

10.04.2018

Проведение анализов на ПЦР гепатита С позволяет определить конкретную структуру вируса, выяснить, какими особенностями обладают его генетические материалы, и какое значение они имеют в общей биологической структуре организма. Название ”ПЦР” относится, в первую очередь, к основному способу проведения такого обследования.

Проведение анализов на ПЦР гепатита С позволяет определить конкретную структуру вируса

Что такое ПЦР

Метод ПЦР, который может называться также методом HCV, используется в нескольких случаях:

  1. У больного возникли симптомы, указывающие на то, что его печень воспалена.
  2. Ранее опасность возникновения гепатита уже была отмечена, и пациент проходит плановый профилактический осмотр.
  3. Необходимо определить наличие вируса в крови людей, недавно контактировавших с больным.
  4. Если больной страдает от нескольких видов гепатита сразу и необходимо выяснить, какой именно из них является ключевым и приносит наибольший вред организму. Определение РНК вируса методом ПЦР позволит в этом случае начать единственно правильное лечение.
  5. Необходимо определить, насколько активно развивается вирус, если ранее было определено его наличие в организме.
  6. У больного возникли симптомы, указывающие на развитие цирроза печени.
  7. Необходимо отследить, какое влияние на организм больного производит назначенное ранее и начатое лечение.
  8. Есть вероятность скрытого течения болезни.
  9. Необходимо проверить, сохранились ли следы заболевания в организме после выздоровления.

Анализ крови ПЦР при гепатите С: что такое он может дать при исследовании? В первую очередь, он позволит определить наличие заболевания самого по себе. Кроме того, такая диагностика дает возможность:

  • выяснить основную проблему, если больной страдает от нескольких видов гепатита;
  • подобрать наиболее адекватную заболеванию схему лечения;
  • определить, есть ли опасность заражения после контакта с больным.

Если в крови пациента не обнаружено признаков PHK гепатита (HCV), значит, заражения не произошло. В свою очередь наличие такого генетического материала практически всегда означает необходимость дополнительных анализов. Они позволят определить то, насколько сильно развилась болезнь.

Разновидности исследований методом ПЦР

Порой на ранних стадиях заболевания анализ не даёт никакого результата, хоть в крови всё равно есть антитела, указывающие на развитие гепатита. Это требует дополнительного гибридизационно-флуоресцентного ПЦР-исследования, которое позволяет получить значительно более точные результаты. Это обеспечивает его высокая чувствительность.

Помимо этого, сдать анализ ПЦР РНК (HCV) можно также в двух разных вариантах:

  1. Качественное исследование. Такой вид анализов указывает на то, содержит ли вообще кровь вирус гепатита. Он позволяет определить заболевание даже на ранних стадиях. Порой качественное исследование ПЦР совмещают с другими аналогичными анализами, если результаты кажутся неточными.
  2. Количественный анализ на гепатит. Этот тест часто проводится после того, как качественный уже дал положительный результат. Он необходим для определения того, какой именно процент крови содержит следы вируса.

Диагностика такого типа считается достаточно точной и безопасной. При сдаче крови необходимо соблюдать обычные правила:

Перед сдачей анализа ПЦР надо отказаться от алкоголя и курения

  • обращаться в лабораторию натощак;
  • за трое суток до сдачи крови рекомендуется отказаться от любой вредной пищи, в том числе, сладких, острых, маринованных и жирных продуктов, белого хлеба и выпечки;
  • отказаться от алкоголя и курения;
  • отказаться от крепкого чая и кофе;
  • отказаться от приёма лекарств, в том числе тех, которые необходимо использовать регулярно из-за того или иного хронического заболевания (если по какой-то причине прервать курс никак нельзя хотя бы на короткий срок, необходимо предупредить лечащего врача, возможно, придется немного изменить обычную дозу).

При точном соблюдении этих правил сдачи венозной крови, можно быть практически уверенным, что полученный результат окажется максимально точным и отразит все особенности состояния пациента.

Необходимо также предупреждать специалиста, занимающегося лечением, обо всех хронических заболеваниях, вредных привычках, возможной беременности и других особенностях анамнеза. Даже если по каким-то причинам это кажется неудобным, избегать этого ни в коем случае нельзя, иначе терапия может пойти по неправильному пути.

Количественный ПЦР

ПЦР количественный позволяет определить то, какое количество вируса уже находится в организме. Конкретно он определяет количество РНК вируса гепатита С в кубическом сантиметре крови. Единицами измерения в этом случае выступает МЕ/мл. МЕ в этой системе — международная единица.

Количественным методом ПЦР гепатит С анализируется в следующих случаях:

  • в самом начале заболевания для определения того, как далеко оно зашло;
  • в конце 3 месяца терапии, чтобы определить, насколько действенной она оказалась.

Такой ПЦР-реакцией специалисты выясняют также следующее:

  1. Уровень того, насколько заразен больной.
  2. То, насколько далеко зашло заболевание.
  3. Наиболее адекватные методы лечения.
  4. Необходимый срок лечения.

Помимо него существует также и качественный вид исследования.

Качественный

На гепатит С качественный анализ проводится в некоторых случаях:

  • на начальном этапе заболевания для определения его наличия;
  • после того как пациент переболел, и необходимо определить, что в его крови не осталось следов заболевания;
  • при необходимости определения того, насколько пациент заразен для контактирующих с ним людей.

Качественный анализ может указать только на то, содержится ли в анализе крови вирус. В отдельных случаях ПЦР может не дать достоверного результата: например, тогда, когда процент вируса крайне низок.

Генотипирование используется для определения того, каким конкретно вирусом заражён больной

Генотипирование

Этот способ анализа используется для определения того, каким конкретно вирусом заражён больной. На данный момент в мире их существует 11, при этом на территории России наиболее популярны только три вирусных генотипа.

Поскольку для каждого возбудителя необходима собственная схема лечения и период, который больной должен избегать плотных контактов с другими людьми, это крайне важная методика. Избегать её нельзя — иначе излечение может быть значительно затруднено. Особенно он важен тем пациентам, у кого заболевание нетипичное для данной географической местности.

В отдельных случаях генотипирование также становится важным указателем на состояние печени: гепатит 3 типа часто вызван стеатозом, и его развитие соответствует ухудшению состояния печени.

Расшифровка

Расшифровка ПЦР-анализа позволяет определить некоторые особенности заболевания. В её основе лежат следующие сведения:

  1. Наличие самого диагноза. Определяется качественным видом анализа показателей крови. Обычно помечается просто ”Найдено” или ”Не найдено”. Норма при гепатите требует также отсутствия антител JgM. Это значит, что не обнаружено признаков заболевания в организме.
  2. Указание концентрации рибонуклеиновой кислоты гепатита в крови. Это наиболее важный результат анализа, указывающий на то, насколько велика вирусная нагрузка. Количественный ВГС-анализ (ПЦР) позволяет ее определить с высокой точностью.
  3. Генотипический анализ ПЦР (HCV) РНК указывает на то, какой именно формой гепатита страдает пациент. Если по каким-то причинам цифра не указана, это показывает, что ПЦР-анализ на гепатит нашел вид заболевания, который не известен на территории России. В этих случаях используются более редкие анализаторы, позволяющие определить конкретный тип. Время от времени можно увидеть также и подтип заболевания, обозначенный латинской буквой. Однако это не имеет большого значения для определения методики лечения и того, как долго должна продолжаться терапия. Поэтому в большинстве случаев специалисты не обращают на такие пометки особого внимания. Они могут иметь значение только в отдельных случаях, если речь идет о редком виде патологии.

В некоторых случаях может быть так, что качественный анализ указывает на отсутствие заболевания, в то время, как результаты иммуноферментного осмотра свидетельствуют о том, что в крови ещё содержатся следы антител против генотипа этой патологии.

Такое расхождение в результатах может возникнуть после недавно перенесённого острого заболевания. Основным анализом, на который опираются специалисты, остается все же ПРЦ, иммуноферментный анализ используется только для первичной оценки ситуации.

Видео

Нужно ли сдавать количественный ПЦР перед началом лечения гепатита С?

Расшифровка анализа ПЦР гепатита C Ссылка на основную публикацию Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

Все об анализе ПЦР для обнаружения гепатита С

ПЦР — полимеразная цепная реакция, которая используется в молекулярной биологии. При помощи данного лабораторного исследования предоставляется возможность не только выявить наличие в организме вируса, но и определить его тип и количество. ПЦР на гепатит С широко используется при диагностике инфекционных заболеваний ЖКТ (язв, колитов, гепатитов и т. д.).

Наибольшую нагрузку при развитии болезней ЖКТ испытывает печень, которая осуществляет детоксикацию организма. Она выполняет роль фильтра, выводя из организма субстраты, излишки которых приводят к интоксикации и возникновению серьезных проблем со здоровьем.

Часто именно печень подвергается воздействию вирусных заболеваний, среди которых преобладает гепатит.

Если своевременно его не выявить и не начать лечение, то это может привести к печальным последствиям, вплоть до летального исхода.

Поэтому при появлении у человека симптомов гепатита врачи назначают анализ ПЦР, который помогает быстро диагностировать болезнь и выявить природу ее происхождения.

Сегодня диагностика гепатита С происходит при помощи иммунограммы и биопсии печени. Эти исследования помогают определить антитела в организме, которые приводят к поражению клеток печени. Но данные методы не позволяют определить наличие болезни на все 100 %. Наиболее точную информацию о наличии вируса гепатита С дает лабораторное исследование ПЦР.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

Этот анализ проводится в определенных условиях, благодаря которым имеется возможность выстроить цепь РНК в биологическом материале. Происходит это из-за того, что когда организм поражает вирус, его частицы все равно попадают в кровь. И при их соединении со специальными молекулами в определенной среде начинает выстраиваться комплементарный вирусный РНК.

При его последующем исследовании удается выявить вирус гепатита С в организме и процесс разрушения печени, если он начался. Делают ПЦР только после того, как в крови пациента обнаруживаются специфические антитела, которые вырабатываются иммунной системой при поражении организма вирусом.

Как только анализ ПЦР проводится, на бланке указывается: РНК «обнаружено» или «не обнаружено». Однако в некоторых ситуациях указывается «недостаточно материала», и здесь требуется повторная сдача анализа.

Если концентрация вирусных частиц в исследуемом материале меньше минимального количества, то это указывает на отсутствие гепатита С. Однако отрицательный результат на РНК может наблюдаться и тогда, когда организм подвергся совершенно недавно заражению: частиц вируса настолько мало, что тест-система их просто не смогла обнаружить.

Если анализ РНК положительный, это свидетельствует о том, что количество вирусных частиц в исследуемом материале превышает нижний порог, что указывает на наличие инфекционного процесса. Следует отметить, что высокие показатели анализа ПЦР уже являются доказательством развития болезни и говорят о необходимости проведения лечения.

Читайте также:  Грыжа пищевода: симптомы, диета и способы лечения болезни

Анализ ПЦР иногда может быть ложноположительным и ложноотрицательным. Последний наблюдается тогда, когда в среде, в которой проводится исследование, находятся компоненты, подавляющие образование цепи РНК вируса. В результате этого не удается своевременно выявить гепатит, что приводит к его дальнейшему прогрессированию.

Повлиять на результат анализа может гепарин, который находится в крови пациентов. Также ошибочный результат может являться следствием несоблюдения условий транспортировки биологического материала и его хранения.

Ложный положительный результат анализа ПЦР наблюдается в том случае, если биологический материал был помещен в загрязненную пробирку либо при наличии вируса гепатита в организме, но другого типа.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

На качественность результата анализа ПЦР может повлиять высокая концентрация криоглобулинов в крови. Поэтому, чтобы получить более точные ответы, рекомендуется перед анализом сдать кровь на выявление данного вещества. Это позволит заранее определить возможные искажения результатов анализа.

После того как качественный анализ ПЦР будет сделан и по итогам исследования в крови обнаружится высокая концентрация частиц вируса, пациенту назначают специфическое лечение. Однако следует понимать разницу между гепатитом В и гепатитом С. Если от первого имеется возможность вылечиться, то от второго — нет. И чаще всего он требует пересадки печени.

Количественный анализ ПЦР

Количественный анализ ПЦР дает возможность выявить частицы вируса в крови и определить степень поражения печени. Это более качественный анализ, который дает достоверные результаты. Итоги исследования выражаются в единицах измерения: количестве копий на мл (копии/мл).

Количественный анализ ПЦР проводят перед тем, как начинается лечебная терапия. Затем его проводят каждые 10–14 дней, чтобы следить за эффективностью проводимого лечения. Оценка на 12 неделе лечения является наиболее показательной.

Для проведения такого анализа не требуется какой-либо специальной подготовки. Единственное, что необходимо сделать пациенту, это, естественно, отказаться от алкоголя и курения за один-два часа до взятия биологического материала. Для данного исследования берется кровь из вены.

В разных лабораториях существуют разные значения исследований. В некоторых используются копии/мл, а в некоторых — МЕ/мл: 4 копии/мл равняются 1 МЕ/мл.

Положительным результат РНК считается в том случае, если виремия превышает 800 000 МЕ/мл или 3 000 000 копий/мл. Отрицательным ответ является, когда данные показатели не превышают порога 400 000 МЕ/мл.

При этом в бланке анализа итог проводимого исследования может быть указан не в цифрах, а в виде значения: ниже, выше нормы, не обнаружено и т. д.

Значение «РНК ниже диапазона измерения» указывает на то, что частицы вируса присутствуют в исследуемом материале, но в очень маленьких количествах.

Если при последующих исследованиях данные значения будут возрастать, это уже свидетельствует о прогрессировании болезни.

Если в анализе указано «РНК не обнаружено», то это говорит о том, что вирус гепатита С и других его типов отсутствует и человек здоров.

ПЦР — один из самых достоверных анализов. При помощи его можно не только выявить уже прогрессирующий гепатит, но и начальную стадию его развития, что позволяет своевременно начать лечение и предотвратить быстрое развитие патологии.

Что показывает анализ на ПЦР и как его расшифровать?

Гепатит С – это инфекционное заболевание печени, которое появляется как результат инфицирования вирусом гепатита С, распространяющегося, как правило, через контакт с кровью человека, являющегося обладателем вируса.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

Около восьмидесяти процентов людей, имеющих гепатит С, не наблюдают у себя абсолютно никаких симптомов, болезнь может проявлять себя лишь изредка по прошествии какого-то периода после заражения.

Симптомы:

  • Усталость;
  • Утрата аппетита;
  • Боль в животе;
  • Рвота;
  • Тошнота;
  • Изменение цвета мочи и кала;
  • Суставные боли;
  • И прочее.

Такие признаки появляются примерно на седьмой неделе после заражения, хотя данный срок может варьироваться. Если вы наблюдаете у себя какие-либо из вышеперечисленных симптомов, срочно сдайте анализ на гепатит С и обратитесь к специалисту, потому что диагностировав болезнь на ранних этапах, можно в значительной степени повысить шансы на полное излечение.

Вашему вниманию представлена статья о первых симптомах гепатита С здесь. Диагностика данной болезни содержит в себе несколько разных анализов крови. Самый первый – скрининг-тест, выявляющий наличие антител к вирусу заболевания (белков, которые содержатся в крови и вырабатываются организмом как ответ вирусу).

Если результаты теста останутся положительными, это будет значить, что у организма наличествовал контакт с вирусом и сейчас нужно сдать анализ крови на гепатит С для установления наличия вируса при помощи метода ПЦР.

Исследование ПЦР у мужчин: что это?

Установление РНК вируса гепатита С, используя метод ПЦР – это основной способ диагностики, который даст шанс обнаружить генетический материал вируса заболевания в кровяной сыворотке и тканях организма человека.

Наивысший стандарт выявления данной болезни – обнаружение в крови предполагаемого больного РНК. Если результат качественной ПЦР окажется положительным, это говорит о наличии веримии и развивающейся репликации HCV.

Нахождение РНК HCV при положительном определении антител означает, что пациент болен гепатитом. Метод ПЦР является основным для установления наличия гепатита С на ранних его стадиях, которые еще не позволяют найти в крови антитела.

Помните, что даже если ПЦР вышел отрицательным, это не значит, что HCV не находится в организме. Отрицательный результат вполне имеет место быть при наличии гепатита С в хронической форме.

Показания:

  • Скриннинг-исследования как профилактика;
  • Изучение лиц, состоящих в контакте;
  • Выявление гепатитов смешанной этиологии с целью определения доминирующего вируса;
  • Контролирование эффективности осуществляемой терапии;
  • Цирроз печени; Признаки цирроза печени у мужчин можно узнать здесь.
  • Уменьшение аппетита, быстрая утомляемость, усталость, слабость, болевые ощущения в мышцах и суставах и так далее;
  • Желтуха, зуд, увеличение объема селезенки;
  • И прочее.

Качественный анализ

Анализ при использовании качественного метода ПЦР предоставляет такие результаты:

  • ПЦР- отрицательно, определяемый возбудитель в организме обнаружен не был;
  • ПЦР- положительно, в исследуемых образцах найдены последовательности, характерные для некоего возбудителя.

Если результат анализа положительный, значит вы с 95% вероятностью больны гепатитом С. ПЦР комплекты, которые применяются для проведения диагностических процедур, точны практически на сто процентов.

На пятипроцентную ошибку повлиять может лишь человеческий фактор, к примеру, несоблюдение правил содержания реактивов и методики осуществления исследования могут понизить точность полученных результатов.

Количественный анализ

Данный тип анализа покажет степень концентрации вируса в крови пациента. Вирусная нагрузка – это число единиц генетического материала, находящаяся в крови человека в установленном объеме. Данное число выражается в цифрах, его отображение может различаться.

Используя этот метод, есть возможность определить количество комплектов ДНК возбудителя, содержащееся во взятых от больного образцах. Чем их больше- тем более тяжел процесс протекания заболевания. Кроме того, по уменьшению вирусной нагрузки можно установить, насколько успешным является проводимое лечение.

ВРАЧИ РЕКОМЕНДУЮТ!

Как избавиться от простатита без помощи докторов, в домашних условиях?!

  • чтобы прекратились боли
  • нормализовать мочеиспускание
  • чтобы появилось сексуальное желание и возможность провести половой акт
  • Пошатнувшееся мужское здоровье можно и нужно восстановить! с помощью своевременного курса лечения. Читать далее »

Расшифровка

Расшифровка исследований на гепатит С, осуществленная по методике количественного ПЦР, может принести данные результаты:

  • Качественные показатели:
    • «Найдено». Этот результат следует понимать следующим образом: в образце, который подвергался исследованиям, были найдены частицы РНК вируса гепатита С. То есть факт инфицирования им пациента существует. Вся эта информация вполне может сигнализировать о том, что возбудитель болезни продолжает размножаться и развиваться в человеческом организме, заражая здоровые клетки и разрушая печень.
    • «Не найдено». Это говорит о том, что фрагменты РНК в анализируемом образце обнаружены не были. Существует вероятность минимальной концентрации РНК возбудителя в анализируемом образце, а значит и не выявления ее путем проведения тестирования. В этих случаях считается, уровень концентрации располагается ниже порога чувствительности исследования.
  • Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦРКоличественные показатели. Число вируса выражается в числах. Для этого применяются различные показатели измерительных единиц: или международная единица на миллилитр, или число копий РНК в миллилитре. По средним показателям одна первая единица соответствует четырем вторым, потому что каждая система тестирования обладает отличающимся коэффициентом перевода данных измерительных единиц. Если значение исследования в результате получилось меньше 400000 МЕ/мл- это невысокая степень вирусной нагрузки, так как высокая начинается с 8000000 МЕ/мл. Такая оценка по количеству позволяет установить степень инфекционности болезни пациента. Чем показатель выше, тем более высок риск передачи возбудителя окружающим (вертикальным способом или при половом контакте).
  • Итог «ниже диапазона измерений».Значение такого вердикта- невозможность при помощи количественного анализа найти РНК гепатита при уже установленном присутствии вируса в организме (небольшая концентрация).Это подтвердилось с помощью проведения еще одного качественного ПЦР, его положительный результат доказал присутствие вируса в организме.
  • Итог «не обнаружено». Такая расшифровка говорит о необнаружении в крови пациента специфических частиц вируса гепатита С.

Цена и сроки

Как долго будет делаться анализ на гепатит С? Результаты могут быть получены вами как через несколько часов, так и через неделю с лишним. На время подготовки исследований напрямую влияют тип вируса и выбранная методика исследования.

Самый быстрый анализ – это ПЦР, результаты которого будут известны вам уже через несколько часов. Стоимость анализа на выявление гепатита С варьируется от четырехсот до одиннадцати тысяч рублей.

Подготовка к проведению исследования

Нами уже было выяснено, какие анализы нужно сдать при наличии такого заболевания и как должно осуществляться выполнение исследований по той или иной методике. Еще один, не менее важный аспект- непосредственная подготовка к проведению исследования.

Для того чтобы итоговые результаты получились как можно более точными, придерживайтесь перечисленных ниже рекомендаций:

  • Анализ сдается с утра и натощак. Последний прием пищи должен быть совершен минимум за восемь часов до начала исследований;
  • Забор самого материала может быть произведен как в дневное, так и в вечернее время суток. Здесь важно, чтобы между приемом пищи и проведением анализа прошло не менее шести часов;
  • Перед тем как сдавать кровь на выявление вируса гепатита С, не пейте чай, сок, кофе и прочие напитки. Под запрет не попадает лишь вода;
  • За сорок восемь часов до начала осуществления анализа ограничьте себя в употреблении жирного и жареного, а также алкогольных напитков;
  • Как минимум час до осуществления исследований не курите;
  • Не нужно делать анализ тотчас же после того, как вы прошли ультразвуковое, инструментальное или рентгенологическое обследование, насладились сеансом массажа или только что закончили физиотерапию;
  • За сутки до проведения анализа позаботьтесь об исключении употребления каких-либо лекарственных препаратов, а также высоких физических нагрузок. Нагрузки на эмоциональном уровне также более чем нежелательны;
  • За пятнадцать минут перед выполнением процедуры вы уже должны находиться в крайне спокойном состоянии духа.

Вирусная нагрузка при гепатите С

Анализ ПЦР на гепатит С — это исследование, направленное на выявление возбудителя инфекции (HCV) и происходящее в режиме реального времени, обнаруживает генетический материал вируса и его нагрузку в крови.

Линейный диапазон концентрации на аппликаторе должен быть равен 7,5х10 (2) — 1х10 (8) копий/мл образца.

Молекулярно-биологический метод диагностирования помогает установить наличие и степень зараженности организма человека, а также схему дальнейшего лечения и ее эффективность.

Важным моментом в гепатите С является его генотип, от которого зависит результативности лечения заболевания. HCV делится на шесть генотипов, которые разделятся на несколько субтипов. Согласно ВОЗ, генотип обозначается арабскими цифрами, а субтип — латинскими строчными буквами.

Генотип 1 дает минимальную реакцию на лечение, не же ли другие. Генотип 4 встречается чаще всего в Восточной Африке, а генотип 5 — Южной Африке, а генотип 6 — в Юго-Восточной Азии. Поэтому генотип HCV считается самым важным фактором в определении эффективности лечения вируса.

Нагрузка инфекции при гепатите С  — не изученный аспект медицины, так как однозначного мнения на данную тему нет.

Это отмечается тем, что по результатам исследования получаются неоднозначные результаты, по которым невозможно определить четкую связь между наличием РНК и белков ВГС в организме инфицированного.

Для детального изучения применяется такой метод как “ОТ-ПЦР” (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией), “ПЦР in situ” и другие. Белки гепатита С выявляются благодаря поликлональной сыворотке или моноклональным антителам.

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР

Количественный и качественный анализы

Для изучения и анализа распределения РНК гепатита С применяют количественный и качественный анализ ОТ-ПЦР. Активность патологии в печени, приводящая к циррозу, оценивается по шкале реакции фермента АЛТ (аланинаминотрасферазы) и ИГА (индексу гистологической активности).

Для того, чтобы выявить РНК  нужно сдать HCV биохимический анализ крови, в котором определится наличие и доля вируса.

Для самостоятельного изучения результатов анализа важно знать две вещи:

  1. Качественный анализ исследования крови отвечает на вопрос “присутствует ли РНК вируса?”
  2. Количественный — отвечает на вопрос “если да, то в каком количестве?”

Если полученные данные подтверждают присутствие в организме РНК вируса, то необходимо каждые полгода проходить ПЦР исследование (HCV-РНК качественный).

ПЦР наиболее чувствительный метод, который показывает низкую нагрузку в диапазоне до 800 000 МЕ/мл (8 х 10 (5) МЕ/мл) или высокую — свыше 800 000 МЕ/мл.

Стоит отметить, что, если результат анализа показывает низкое значение РНК в крови, то у человека нет хронического гепатита С. Для того, чтобы убедиться, что в организме больше нет вируса, необходимо сдать повторные анализы на протяжении двух лет с помощью текст-систем.

Важно помнить, что результаты разных лабораторий могут разниться, так как в каждом учреждении используются свои методы исследования, зависящие от способа забора и хранения крови. Поэтому лучше всего сдавать анализы в одном месте, чтобы был виден рост или падение вирусного заболевания.

Типы тестов

Тесты для выявления вируса “гепатит С” разделяются на два вида:

  • качественные, подтверждающие наличие хронической инфекции;
  • количественные, прогнозирующие результат лечения.

Например, “Экспресс-тест на гепатит С” производит предварительный, но не точный (как в лаборатории) анализ крови. В такой набор входят: пипетка, стерильные салфетки, скарификатор, тест-кассета, буфер — растворитель. проводить данную манипуляцию нужно из подушечки пальца.

Также в настоящее время особую популярность набирает иммунохроматографический тест, в котором лежат 1 или 25 тестовых полосок. Количество полосок зависит от цены медицинского устройства.

Для того чтобы проверить работоспособность печени, врач может назначить печеночный тест (пробу), который покажет о наличии или отсутствии каких-либо повреждений печени, уровень общего белка, альбумина, билирубина, а также АЛТ и АСТ, маркеры гепатита С.

Не стоит пренебрегать советам лечащего доктора, лучше сдать лишний анализ, чем потом мучиться и плакать о том, что какого-то показателя не хватило, а он был очень важен.

Стоимость анализов

Согласно мониторинговой статистике цен, анализы на выявление в организме вируса “гепатит С” стоят не малых денег.

Например,определение РНК в плазме крови (HCV-RNA) стоит 9 800 рублей, качественный тест — 370 рублей, количественный — 1 290 рублей, забор крови — 500 рублей.

Но в законодательстве предусмотрены квоты для больных инфекционными заболеваниями, но зачастую многие не дожидаются их и поэтому прибегают к платному лечению.

Тест-полоски в настоящее время вещь хорошая, но относительно дорогая:

  • тест ВГС  стоит в аптеке  220 рублей (1 полоска);
  • тест ВГС стоит в аптеке 2 750 рублей (25 полосок).

Поэтому, если Вы узнали о том, что в Вашем организме поселился вирус, но у Вас нет денежных средств, все равно немедленно обратитесь к врачу, так как для диагностики заболевания необходимо пройти много анализов и обследований, а некоторые результаты которых получаются не сразу, а через несколько дней или недель. Не думайте о деньгах, обращайтесь за помощью к доктору, он поможет решить Вашу проблему.

Что делать, если анализ положительный?

Пройдя комплексное обследование на гепатит С, Вы получили “положительный” результат, не расстраивайтесь, а лучше пройдите анализы повторно, так как может быть ложноположительный ответ на выявление инфекции. Причинами такого результата служат:

  • неисправная техника, на которой происходит тестирование био-материалов;
  • некачественные реактивы;
  • чувствительностью метода исследования;
  • неправильная подготовка пациента-больного к исследованию (например, инфицированный ел до проведения анализа).

Согласно приказу Роспотребнадзора все результаты с пометкой “положительный” отправляются в ОРУИБ.

После того, как повторный полученный результат окажется со знаком “+”, следует записать на прием к врачу-инфекционисту, разузнать о таком диагнозе как гепатит С. О методах и способах лечения гепатита с читайте здесь.. Далее необходимо установить генотип инфекционного заболевания, от которого зависит продолжительность курса лечения.

Многие врачи также советуют на всякий случай проверить печень на наличие фиброза, цирроза или рака. После полученных результатов УЗИ, эластографии, биопсии и фибросканирования желательно обговорить со своим лечащим врачом о возможности лечиться бесплатно.

Также у доктора важно уточнить о таких способах лечения как терапия софосбувиром, даклатосвиром, ледипасвиром.

Главное ни в коем случае не заниматься самолечением и не прибегать без разрешения врача к народной медицине. Так как в борьбе с гепатитом С главное не упустить время и вовремя начать соответствующее и индивидуальное лечение.

  • Смотри также:
  • Причины заражения гепатитом с
  • Что делать при беременности и гепатите с
  • Диета при гепатите
  • Срок жизни с гепатитом с
  • Гепатит с и его симптомы
  • Сколько живут с циррозом печени
  • Симптомы цирроза печени
  • Причины цирроза печени
  • Как лечить цирроз
  • Народная медицина при циррозе
  • Что можно есть при циррозе
  • Асцит, портальная гипертензия и другие осложнения при циррозе
  • Узи и анализ крови при циррозе печени
  • Диета при фиброзе
  • Фибротест печени
  • Причины фиброза печени
  • Фиброз печени при гепатите с
  • Смерть от фиброза печени
  • Как лечить фиброз печени

Пцр диагностика гепатита с

Как определяют гепатит С с помощью анализа крови ПЦР Анализ ПЦР на гепатит С представляет собой внутривенный забор крови с целью определения в ней вируса РНК гепатита на генетическом уровне. Своё название анализ получил исходя из метода исследования.

ПЦР — это полимеразная цепная реакция, с помощью которой в сыворотке крови определяют наличие гепатита С. Итог может быть положительным и отрицательным.

Достоинства метода ПЦР

Этот метод диагностики обладает следующими достоинствами:

  1. Метод ПЦР позволяет определить следующие результаты:
    • наличие вируса РНК;
    • степень радиоактивного излучения;
    • первоначальную генетическую информацию;
    • уникальность и неповторимость генетических данных.
  2. Можно использовать любой необходимый клинический материал:
    • кровь;
    • плазма;
    • моча;
    • биологические жидкости и выделения;
    • мокрота и другие.
  3. Позволяет определить в крови более одного микроорганизма одномоментно, в отличие от других проб.
  4. Получение результата в течение суток.
  5. Упрощённые методы хранения и транспортировки анализа, возбудители определяются даже в мёртвой среде.
  6. Уникальность ПЦР позволяет выявлять определённые микроорганизмы, которые не поддаются ни одной другой пробе.
  7. Высокая степень чувствительности реактивов, тест является самым точным в своём роде.

Особенности качественного анализа ПЦР

  • Качественный тест проводится с целью определения наличия вируса в крови и получения отрицательного или положительного итога.
  • Показанием к проведению этого вида диагностики является выявление в организме пациента антител к гепатиту С.
  • Возможные итоги:
  • обнаружено (положительный);
  • не обнаружено (отрицательный).

Качественный тест не подходит пациентам с очень низким содержанием вируса в крови, так имеет определённую чувствительность.

Результат «обнаружено»

Обнаружить вирус гепатита С можно уже через несколько недель после инфицирования организма, даже при отсутствии антител к этому возбудителю. Такой результат свидетельствует о наличии в организме и кровипациента фрагмента РНК, характерного для гепатита С.

Пациент считается инфицированным данным вирусом и подвергается дальнейшему распространению патогенных клеток в организме.

Результат «не обнаружено»

Такой вариант говорит о том, что в исследуемом образце биологического материала отсутствуют фрагментыРНК специфичные для гепатита С. Это отрицательный результат.

Чувствительность теста не позволяет выявить низкое содержание фрагментов РНК, поэтому итог «не обнаружено» не всегда является правдоподобным.

Особенности интерпретации результатов

Главной особенностью интерпретации результатов является порог чувствительности метода ПЦР.

Он зависит от следующих показателей:

  • точность проведения исследования;
  • вид и качество используемой аппаратуры.

Отмечено, что чувствительность может колебаться в пределах 10-500 МЕ/мл. Из этого следует, что если в организме исследуемого пациента присутствует вирус в концентрации меньше 10 МЕ/мл тест покажетрезультат «не обнаружено». Но это вовсе не означает, что возбудитель полностью отсутствует.

Варианты диагностических систем

На данный момент выделяют следующие варианты систем диагностики:

  1. Если забор крови проводится у пациента, находящегося на противовирусном лечении, то должны быть использованы системы диагностики чувствительностью не меньше 50 МЕ/мл. Для этой цели применяют следующие анализаторы:
    • Cobas Ampicolor ВГС-Теst;
    • РеалБест РНК ВГС.
  2. Чтобы поставить окончательный диагноз «гепатит С» необходимо обнаружить РНК вирус в трёх разных заборах биологического материала. Эти рекомендации разработаны Всемирной Организацией Здравоохранения. Эсли итог трехкратно отрицательный, то диагноз не подтверждается.
  3. На данный момент помимо метода ПЦР существует более точный тест, именуемый ТМА (транскрипционный метод амплификации). Его порог чувствительности гораздо выше, чем в других методикахдиагностики.

Диапазон выявляемых модификаций вирусов

На данном этапе развитии генетики известно несколько видов и вариантов модификации вирусов.

Лабораторная диагностика в нашей стране со стопроцентной точностью может определить следующие генотипы:

  • 1а;
  • 1в;
  • 2а;
  • 2в;
  • 2с;
  • 3;
  • 4;
  • 5а;
  • 6.

Особенности количественного анализа ПЦР

Количественный анализ представляет собой определение вируса гепатита С в организме человека. Во время исследования с помощью ПЦР определяют РНК и вирусную нагрузку в исходном материале.

Иначе, можно сказать, что тест позволяет выявить какое количество вирусных клеток находится в биологической жидкости. Для этого вида исследования используется только венозная кровь.

Специфической подготовки к тесту нет.

Количественный анализ позволяет вести контроль на уже начавшемся этапе лечения и оценивать его эффективность. Для оценки берут данные теста до начала и во время терапевтических мероприятий. С помощью полученных результатов можно прогнозировать течение болезни.

При успешности выбранного метода лечения через 3 месяца количество РНК должно уменьшиться в несколько раз. Согласно рекомендациям количественный анализ проводят через один, затем через три и шесть месяцев. Последний результат при успешности лечения должен быть отрицательным.

Оценка результатов количественного теста ПЦР

В нашей стране существует 2 возможных варианта оценки результата количественного теста ПЦР:

  • количество копий на миллилитр биологической жидкости;
  • количество международных единиц на миллилитр.

Чтобы получить международные единицы количество копий делят на 4.

Выделяют 2 уровня нагрузки или виремии:

  • высокая с показателем ПЦР выше 800000 МЕ/мл;
  • низкая с показателем ПЦР ниже 400000 МЕ/мл.

Результат количественного теста предусматривает 2 варианта:

  • «ниже диапазона измерений»;
  • «не обнаружено» (отрицательный).

Оставьте комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Adblock
detector